流式細胞儀是怎么運行的

流式細胞儀的分選功能是由細胞分選器來完成的?？偟倪^程是：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據(jù)選定的某個參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發(fā)生偏轉(zhuǎn)，落入收集器中；其它液體被當作廢液抽吸掉，某些類型的儀器也有采用捕獲管來進行分選的。穩(wěn)定的小液滴是由流動室上的壓電晶體在幾十KHz的電信號作用下發(fā)生振動而迫使液流均勻斷裂而形成的。一般液滴間距約數(shù)百μm。實驗經(jīng)驗公式f=v/4.5d給出形成穩(wěn)定水滴的振蕩信號頻率。其中v是液流速度，d為噴孔直徑。由此可知使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度，可能會改變分選效果。使分選的含細胞液滴在靜電場中的偏轉(zhuǎn)是由充電電路和偏轉(zhuǎn)板共同完成的。

充電電壓一般選+150V，或-150V；偏轉(zhuǎn)板間的電位差為數(shù)千伏。充電電路中的充電脈沖發(fā)生器是由邏輯電路控制的，因此從參數(shù)測定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時間，一般為數(shù)十ms。測定延遲時間是決定分選質(zhì)量的關(guān)鍵，儀器多采用移位寄存器數(shù)字電路來產(chǎn)生延遲?？筛鶕?jù)具體要求予以適當調(diào)整。（50）數(shù)據(jù)處理原理：FCM的數(shù)據(jù)處理主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析，至于對儀器給出的結(jié)果如何解釋則隨所要解決的具體問題而定。①數(shù)據(jù)顯示：FCM的數(shù)據(jù)顯示方式包括單參數(shù)直方圖、二維點圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。

直方圖是一維數(shù)據(jù)用作的圖形顯示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X—Y平面描圖儀給出的曲線。根據(jù)選擇放大器類型不同，坐標可以是線性標度或?qū)?shù)標度，用“道數(shù)”來表示,實質(zhì)上是所測的熒光或散射光的強度。坐標一般表示的是細胞的相對數(shù)。圖10-2給出的是直方圖形式。只能顯示一個參數(shù)與細胞之間的關(guān)系是它的局限性。二維點圖能夠顯示兩個獨立參數(shù)與細胞相對數(shù)之間的關(guān)系。坐標和坐標分別為與細胞有關(guān)的兩個獨立參數(shù)，平面上每一個點表示同時具有相應(yīng)坐標值的細胞存在（圖10-3）。

可以由二維點圖得到兩個一維直方圖，但是由于兼并現(xiàn)象存在，二維點圖的信息量要大于二個一維直方圖的信息量。所謂兼并就是說多個細胞具有相同的二維坐標在圖上只表現(xiàn)為一個點，這樣對細胞點密集的地方就難于顯示它的精細結(jié)構(gòu)。經(jīng)熒光染色的細胞受合適的光激發(fā)后所產(chǎn)生的熒光是通過光電轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)變成電信號而進行測量的。光電倍增管（PMT）為常用。PMT的響應(yīng)時間短，僅為ns數(shù)量級；光譜響應(yīng)特性好，在200～900nm的光譜區(qū)，光量子產(chǎn)額都比較高。光電倍增管的增益從10到10可連續(xù)調(diào)節(jié)　，因此對弱光測量十分有利。

光電管運行時特別要注意穩(wěn)定性問題，工作電壓要十分穩(wěn)定，工作電流及功率不能太大。一般功耗低于0.5W；陽極電流在幾個毫安。此外要注意對光電管進行暗適應(yīng)處理，并注意良好的磁屏蔽。在使用中還要注意安裝位置不同的PMT，因為光譜響應(yīng)特性不同，不宜互換。也有用硅光電二極管的，它在強光下穩(wěn)定性比PMT好。從PMT輸出的電信號仍然較弱，需要經(jīng)過放大后才能輸入分析儀器。

流式細胞計中一般備有兩類放大器。一類是輸出信號輻度與輸入信號成線性關(guān)系，稱為線性放大器。線性放大器適用于在較小范圍內(nèi)變化的信號以及代表生物學(xué)線性過程的信號，例DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關(guān)系。在免疫學(xué)測量中常使用對數(shù)放大器。因為在免疫分析時常要同時顯示陰性、陽性和強陽性三個亞群，它們的熒光強度相差1～2個數(shù)量級；而且在多色免疫熒光測量中，用對數(shù)放大器采集數(shù)據(jù)易于解釋。此外還有調(diào)節(jié)　便利、細胞群體分布形狀不易受外界工作條件影響等優(yōu)點。

低壓制備色譜通常有兩種模式，一種是在柱上方加壓，另一種是在柱下方減壓。除了加減壓外，其他的與經(jīng)典柱色譜法基本一致。減壓一般是用真空泵來完成，加壓一般用空氣泵氮氣鋼瓶蠕動泵等完成。在低壓制備色譜中使用的是顆粒較大的填料，因此其分辨率是有限的?！　≈袎褐苽渖V是利用恒流泵抽送流動相，帶著樣品流經(jīng)色譜柱，實現(xiàn)對樣品的分離。中壓制備色譜系統(tǒng)由溶劑瓶、恒流泵、進樣閥、色譜柱、檢測器、記錄儀和餾分收集器等部分組成。其色譜柱一般是由耐壓的強化玻璃制成，填料顆粒大小比低壓制備色譜所用填料小，分離效率更高。